酶標儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得,也可用分光光度計相同的單色器來得到.在使用濾光片作濾波裝置時與普通比色計一樣,濾光片即可放在微孔板的前面,也可放在微孔板的后面,其效果是相同的.下圖便是目前常用的酶標儀光路系統(tǒng)圖.光源燈發(fā)出的光經(jīng)聚光鏡,光欄后到達反射鏡,經(jīng)反射鏡作90°反射后垂直通過比色溶液,然后再經(jīng)濾光片送到光電管.
它和普通的光電比色計有以下幾點差異:
(l)盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的
聚乙烯材料制成,對抗原抗體有較強的吸附作用,故用它作為固相載體.
⑵由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液.
⑶酶標儀通常不僅用A,有時也使用光密度OD來表示吸光度.
酶標儀可分為單通道和多通道2種類型,單通道又有自動和手動2種之分.自動型的儀器
有X,Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu),可將微孔板L的小孔一個個依次送入光束下面測試,手動型則靠手工移動微孔板來進行測量.
在單通道酶標儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標儀,此類酶標儀一般都是自動化型的.它沒有多個光束和多個光電檢測器,如 12個通道的儀器設(shè)有 12條光束或 12個光源,12個檢測器和12個放大器,在X方向的機械驅(qū)動裝置的作用下,樣品12個為一排被檢測.多通道酶標儀的檢測速度快,但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價格也較高.
酶標儀實際上就是一臺變相的專用光電比色計或分光光度計,其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同.光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光,進入塑料微孔極中的待測標本.該單色光一部分被標本吸收,另一部分則透過標本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號.電信號經(jīng)前置放大,對數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理和計算,最后由顯示器和打印機顯示結(jié)果。微處理機還通過控制電路控制機械驅(qū)動機構(gòu)X方向和Y方向的運動來移動微孔板,從而實現(xiàn)自動進樣檢測過程。而另一些酶標儀則是采用手工移動微孔板進行檢測,因此省去了X,Y 酶標儀方向的機械驅(qū)動機構(gòu)和控制電路,從而使儀器更小巧,結(jié)構(gòu)也更簡單。微孔板是一種經(jīng)事先包理專用于放置待測樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的小孔,孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體,微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液.其常見規(guī)格有40孔板,55孔板,96孔板等多種,不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板,對其可進行一孔一孔地檢測或一排一排地檢測。
3使用注意事項
酶標儀是一種精密的光學儀器,因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準確性和穩(wěn)定性,還能夠延長其使用壽命。根據(jù)DINVDE0871條例,儀器應(yīng)放置在無磁場和干擾電壓的位置。依據(jù)DIN45635-19條例:
儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。
為延緩光學部件的老化,應(yīng)避免陽光直射。
操作時環(huán)境溫度應(yīng)在15℃-40℃之間,環(huán)境濕度在15%-85%之間。
操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。
操作環(huán)境空氣清潔,避免水汽,煙塵。
保持干燥、干凈、水平的工作臺面,以及足夠的操作空間。
酶標儀的功能是用來讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果,因此要得到準確結(jié)果,試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標儀之前是通過目測判斷結(jié)果,操作過程隨意性較大,在使用酶標儀后如果不能及時糾正操作習慣,會造成較大誤差。在酶標儀的操作中應(yīng)注意以下事項:
使用加液器加液,加液頭不能混用。
洗板要洗干凈。如果條件允許,使用洗板機洗板,避免交叉污染。
嚴格按照試劑盒的說明書操作,反應(yīng)時間準確。
在測量過程中,請勿碰酶標板,以防酶標板傳送時擠傷操作人員的手。
請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,操作完成后請洗手。
如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學危害,請嚴格按照試
劑盒的操作說明,以防對操作人員造成損害。
如果儀器接觸過污染性或傳染性物品,請進行清洗和消毒。
不要在測量過程中關(guān)閉電源。
對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差,應(yīng)根據(jù)實際情況及時修改參數(shù),以達到最佳效果。
使用后蓋好防塵罩。 出現(xiàn)技術(shù)故障時應(yīng)及時與廠家聯(lián)系,切勿擅自拆卸酶標儀。
酶標儀(MicroplateReader)是對酶聯(lián)免疫檢測(EIA)實驗結(jié)果進行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進行的,反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示,通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標本中待測抗體或抗原的濃度。
酶標儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗、生物學研究、農(nóng)業(yè)科學、食品和環(huán)境科學中,特別在近幾年中,由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的應(yīng)用,使得酶標儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛,同時促進了生殖健康技術(shù)水平提高。
目前國內(nèi)許多計生站系統(tǒng)開展了酶免檢測項目,如:乙肝五項、愛滋病檢測、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測、激素檢測等。過去多數(shù)采用目測方法,報出的結(jié)果缺乏科學的依據(jù)。例如:某弓形蟲檢測試劑盒中,臨界值規(guī)定為:陰性對照品的OD值×2.5,通過目測無法判斷標本孔的反應(yīng)顏色是否超過臨界值。肉眼進行兩孔之間的顏色比較可能還行,但比較一孔的顏色是否超過另一孔顏色的2.5倍就不可能。
國內(nèi)多家權(quán)威機構(gòu),如衛(wèi)生部臨床檢驗中心和計劃生育系統(tǒng)等多次強調(diào)酶標儀的重要性,并要求酶聯(lián)免疫檢測試劑應(yīng)使用酶標儀判讀,酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標儀,并提供酶標儀測定的原始數(shù)據(jù),而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時酶免檢測的項目往往是一些實質(zhì)性的感染和病變(如:肝炎、艾滋病、優(yōu)生優(yōu)育等),判讀更要求嚴謹,由誤診引起的糾紛很難處理。另外,住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、愛滋等EIA試劑檢測是避免因輸血引起感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段,正逐漸被許多單位所采用。
主要用于血液學檢驗 、基因檢驗及獸殘、農(nóng)殘檢驗項目等
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